生物技术制药

数智人2023-12-27产业问答79
1植物细胞大规模培养的方法按培养基类型有哪些?培养基类型: 分为固体培养 液体培养;固体培养优点:简便易行、所占空间小。缺点:①外植体或其愈伤组织仅有一部分与培养基相接触,该部位的营养物质可被迅速吸收,从而形成培养基中营养物质的浓度差,并进而导致愈伤组织生长的不平衡;②由于外植体的基部插入固体培养基中,因此该处呈现气体交换不畅的状态,阻碍了组织呼吸作用的正常进行,同时也会堆积生长过程中排出的有害物质;③在静止状态下,由于重力作用,以及光线从上部或一侧射人,因而在愈伤组织细胞间出现了极化现象,结果导致细胞群体的不均匀状态;④固体培养物有时需要测定一些生理生化指标(如使用华式呼吸计测量呼吸,或用饲喂放射性核素标记成分来追踪细胞内的物质代谢变化)。固体培养是在培养基中加入一定量的凝固剂,经加热溶解后,分别装入培养用的容器中,冷却后凝结成固体培养基。液体培养系统包括小规模的悬浮培养和大规模的成批培养、半连续和连续培养。悬浮培养可分为静止和振荡两类。静止液体培养和固体培养一样,也具有简便易行的特点,而且培养基还不会出现营养物质浓度差的现象。振荡液体培养,是使悬浮细胞在液体培养基中,并不断振(转)动下进行培养。 2、酶工程制药的基本技术要求有哪些?简述酶和细胞固定化方法? 技术要求: 酶的生产菌种的要求: a、产酶量高,酶的性质符合使用要求,而且最好是产生胞外酶的菌; b、不是致病菌,在系统发育上与病原体无关,也不产生毒素; c、稳定,不易变异退化,不易感染噬菌体; d、能利用廉价的原料,发酵周期短,易于培养。固定化酶制备技术⑴吸附法制备固定化酶技术 (2)埋法制备固定化酶技术 ①界面沉降法 ②界面聚合法(3)联法制备固定化酶技术 ⑷共价结合法制备固定化酶技术固定化细胞制备技术:1)载体结合法 2)包埋法 3)联法 4)载体法酶和细胞固定化方法: ⑴载体结合法 ①物理吸附法 ②离子结合法 ③共价结合法 ⑵交联法 ⑶包埋法 ①网格型 ②微囊型 ⑷选择性热变性法 原文链接://shuzhiren.com/post/71386.html

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KevinMiller
2023-12-27 12:32:33

克隆真核基因常用的方法有逆转录法和和学合成法。 一、逆转录法 逆转录法就是先分离纯化目的基因的mrna,再反转录成互补dna,然后进行互补dna的克隆表达。从产生该蛋白质的真核细胞中提取mrna,以其为模板,在逆转录酶的作用下,反转录合成该蛋白质mrna的互补dna,再以互补dna为模板,在逆转录酶或dna聚合酶作用下,最终合成编码该蛋白质的双链dna序列,该序列不含内含子。 1、mrna的纯化 细胞内含有三种rna,mrna占rna总量的2%-5%,相对分子量大小不一致,分离也有很大的困难,但是mrna的3’末端常含有一多聚腺苷酸组成的末端,长达20-250个腺苷酸,足以吸附于寡聚胸苷酸-纤维素上,从而可以用亲和层析法将mrna从细胞总rna上分离出来,可得到纯度较高的mrna。 2、互补dna第一链的合成 mrna的3’末端常含有一多聚腺苷酸序列,可用寡聚脱氧胸苷酸为引物,在逆转录酶的催化下,开始互补dna的合成。在合成反应体系中加入一种放射性标记的dntp,在反应中以及反应后可通过测定放射性标记的dntp掺入量,计算出互补dna的合成效率,在凝胶电泳后,进行放射自显影分析产物的分子大小,探索最佳反应条件。 3、互补dna第二条链的合成 先用碱解或核酸酶酶解的方法除去互补dna-mrna杂交链中的mrna链,然后以互补dna第一链为模板合成第二链,并用核酸酶s1专一性切除单链dna。 4、互补dna克隆 载体有两种质粒和噬菌体,根据重组后插入的互补dna是否能够表达、能否经转录和翻译 合成蛋白质,又将载体分为表达型载体和非表达型载体。互补dna插入片段小于10千碱基对,可选用质粒载体,如大于10千碱基对则选用噬菌体作为载体。 二、化学合成法 较小的蛋白质或多肽的编码基因可以采用人工化学合成法合成,其先决条件是已知目的基因的核苷酸序列,或已知蛋白质的氨基酸序列,按相应的密码子推导出dna的碱基序列。用化学方法合成目的基因不同部位的两条链的寡核苷酸短片段,再退火成为两端形成粘末端的dna双链片段,然后将这些双链片段按正确的次序进行退火使连接成较长的dna片段,再用连接酶连接成完整的基因。

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